Mikroskopija spora, hifa, cistidija, trama za identificiranje gljivica

Složeni mikroskop pogodan za proučavanje gljivica

Podaci u nastavku sažeti su izvatci iz najnovije knjige Pata O'Reillyja "Fascinated by Fungi" . Potpune detalje i uzorke stranica potražite u našoj knjižari, gdje možete putem interneta naručiti primjerak potpisan od autora ... (Knjiga također sadrži pojmovnik mikoloških izraza, a ovdje imamo sažetu verziju za pomoć početnicima ...)

Mikroskopija i fotomikografija

Kada ne možete identificirati gljivicu na terenu, možda biste trebali ponijeti uzorak kući na daljnje proučavanje. Nema smisla to činiti ako ne postoji nešto što možete učiniti kod kuće, a što niste mogli na terenu. Mikroskopsko ispitivanje je nešto što se najbolje radi u zatvorenom kada imate dovoljno vremena za pravilno obavljanje poslova. Evo nekoliko savjeta o odabiru i korištenju mikroskopa u tu svrhu.

Igrački mikroskopi u redu su za gledanje životinjskih i biljnih struktura, ali za mikologiju vam zaista treba dobar mikroskop. To je zato što su fine strukture gljivica vrlo male - neke su blizu granice onoga što se može riješiti svjetlom. Valne duljine rendgenskih zraka mnogo su kraće od svjetlosnih valova, a toliko se više detalja može proučiti pomoću rentgenske mikroskopije. Ali ako mislite da je optički mikroskop skup alat za nešto što je za većinu nas samo hobi, nemojte ni razmišljati o ponovnom stavljanju kuće u rentgen mikroskop dna dometa.

Spore Lactarius azonita
Spore Lactarius azonita , vidljive kroz leću uljnog mikroskopa

Za proučavanje spora gljivica, bazidija, cistidija, sfaerocista i drugih sitnih svojstava gljivica trebat će vam mikroskop koji može povećati najmanje x 400. U idealnom slučaju, idite na mikroskop s najvećim povećanjem x 1000, ali da biste dobili tako jasne slike pri tako velikom povećanju, trebao bi imati uljnu uronjenu leću.

Dimenzije i ukrasi (bodljikave bradavice, na primjer - vidi sliku, lijevo) spora su ključne značajke koje identificiraju, a kako biste mogli izmjeriti dimenzije stvari koje gledate, trebat će vam okular s okularnim mikrometrom ili neki drugi sredstva za baždarenje. Ako smatrate da su upute uz mikroskop zbunjujuće (ili ako imate dovoljno sreće da pokupite rabljenu pogodbu bez priručnika), netko iz vaše lokalne skupine gljiva gotovo će vam sigurno biti spreman pomoći u postavljanju i kalibriranju vašeg računala. sustav.

Moj vlastiti mikroskop je trinokularni, tako da je adapter fotoaparata koristan čak i dok gledam kroz okulare. (Velik dio vremena jednostavno promatram sliku koja se prenosi na zaslon računala.)

Ostale značajke mikroskopa koje moraju imati uključuju:

  1. Podesivo osvjetljenje, najčešće izravno ispod dijapozitiva, i nazvano osvjetljenje svijetlim poljem. (Za biološke instrumente osvjetljenje tamnog polja također je odozdo, ali pod kutom koji osigurava da izravna svjetlost ne ulazi u cilj; potreban mu je posebni kondenzator tamnog polja ili, za malo povećanje, crni graničnik umetnut u put svjetlosti.)
  2. Kontrolne tipke za pomicanje mehaničkog stupnja koji drži klizač
  3. Grube i fine kontrole fokusa

Kemikalije za bojenje

Sfaerociste u strukturi stabljike Russula cyanoxantha, plamenika ugljena
Sferociste u strukturi stabljike Russula cyanoxantha , šumske gljive koja je poznata kao ugljen, odgovorne su za njezinu lomljivost. Ova je slika snimljena mikroskopom s povećanjem x600. Materijal stabljike na toboganu obojen je crvenom bojom Congo.

Fina struktura spora i mnogi drugi sitni dijelovi gljivica koje ćete htjeti pogledati pod mikroskopom gotovo su u potpunosti prozirne. Jasno se mogu vidjeti tek kad su zamrljani. Kao daljnja pomoć u identificiranju, mnoge gljive proizvode spore koje mijenjaju boju u dodiru s određenim kemikalijama, koje se nazivaju reagensi (zbog reakcije kada spore dođu u kontakt s njima). Evo nekih kemikalija, mrlja i reagensa koji se najčešće koriste u mikološkoj mikroskopiji:

Destilirana voda

(Da, dobri stari H2O!) Ako želite pogledati sitne predmete i vidjeti njihove prirodne boje, voda je idealno sredstvo za vlaženje. Voda iz slavine sadrži kemijske dodatke koji bi mogli ograničiti životni vijek tobogana, a kišnica je kisela i jednako problematična, ali destilirana voda je jeftina i lako dostupna. Možda ćete trebati dodati kap fotografskog sredstva za vlaženje kako biste izbjegli izobličenje slike zbog sićušnih mjehurića zraka pričvršćenih na spore ili drugi materijal. (Tekućina za pranje djeluje!) Dodavanje oko 10% glicerina osigurat će dugotrajnost stakalca prije isušivanja.

Amonijak (NH3)

Ova korisna, ali potencijalno opasna kemikalija odaje izuzetno oštru paru, pa bocu treba sigurno začepiti cijelo vrijeme, osim tijekom uporabe. (Amonijak za kućanstvo iz bilo koje željezarske radnje je u redu.) Kao i reagens koji uzrokuje promjenu boje kod nekih vrsta gljivica, i amonijak je sastavni dio nekih drugih reagensa. Čisti amonijak je plin normalne sobne temperature, a za mikološku uporabu 10% -tna otopina u destiliranoj vodi je normalna koncentracija. To je jako i ako uđe u oči nanijet će ozbiljnu štetu.

Željezni sulfat (FeSO4)

Mnogi odgajivači gljiva i mikolozi nose u svom kompletu kristal željeznog sulfata, u kolokvijalnom nazivu željezne soli, za trljanje gljivica (posebno krhkih škrge) radi provjere reakcije boje. Ne trošite se na štetu kupnje kristala farmaceutskog razreda; stvari koje se prodaju u vrtnim centrima kao sredstvo za uklanjanje mahovine i za snižavanje lužnatosti tla jeftina su prljavština (up!) i jednako dobro djeluju.

Kalijev hidroksid (KOH)

To se koristi i kao medij za pričvršćivanje (obično zajedno s kemikalijom za bojanje) i kao reagens, bilo u polju ili natrag u bazi. Površine kapa ili škrga nekih gljiva dramatično mijenjaju boju kada ih kontaktira KOH; mogu postati žute, crvene, magenta, masline ili crne, na primjer, ovisno o vrsti. Dakle, kada napravite predmet za mikroskop pomoću KOH, on ne samo da je zaštićen od propadanja, već možete izazvati i dijagnostičku reakciju boje koja ponekad može doprinijeti procesu identifikacije kao i podaci o veličini i obliku dobiveni mikroskopom.

Melzerov reagens

Ovaj je koktel kemikalija teško dobiti, jer je jedna od presudnih komponenata potencijalno opasna tvar kloralhidrat (lijek za silovanje datulja). Ostale komponente je jednostavno nabaviti - kristali joda, kalijev jodid i destilirana voda. Jod reagira s škrobnim tvarima dajući intenzivnu plavo-crnu boju, a spore gljivica koje sadrže škrob nazivaju se "amiloidima". Ako se pridružite grupi gljivica u Velikoj Britaniji, možda ćete moći dobiti Melzerov reagens putem Udruženja britanskih gljivičnih skupina (ABFG). Spore gljivičnih vrsta mogu se podvrći dijagnostičkim promjenama boje ako se oboje Melzerovim reagensom. Spore se nazivaju:

  1. Amiloid ako pređu u plavo-crnu boju.
  2. Dekstrinoid ako poprime crvenkastosmeđu boju.
  3. Inamiloidi (ili negativni) ako samo požute ili se uopće ne promijene.

Ti se izrazi koriste u poljskim vodičima koji navode kemijska ispitivanja za svaku vrstu.

Mrlje

Asci od Poronia punctata
Asci od Poronia punctata , Gljivice na noktima

Glavni razlozi za upotrebu mrlja prilikom izrade stakala za mikroskop su:

  1. pojačavaju kontrast na mikroskopskoj slici
  2. istaknuti određene strukture tkiva

Često se mrlje koriste zajedno s drugim kemikalijama koje pomažu u sprječavanju propadanja ili isušivanja predmetnog materijala.

Primjeri sredstava za bojenje uključuju:

Kongo crvena

Izvrsna mrlja opće namjene za promatranje finih detalja hifalnih struktura (na primjer, pogledajte sliku Amanita rubescens škrge, desno, tamo gdje su označene dimenzije u mikronima.) Dostavlja se u obliku praha i najbolje je otopiti u 10% -tnom postotku. otopina amonijaka.

Safranin

Još jedna mrlja koja stvara jezgre crvenih stanica.

Laktofenol pamučno plavi

To mrlje hitin, čineći da se takve strukture poput ukrasa spora pojave mnogo jasnije nego kod većine drugih mrlja (uključujući i kongo crvenu).

Pucaj na rastanku - pa, ovaj je više povezan s izbjegavanjem odlaska. Gore spomenute kemikalije uključuju neke ozbiljno kaustične, kisele i otrovne tvari, pa ih se zaista mora čuvati tamo gdje ih djeca ne mogu dobiti. Dimi od amonijaka, na primjer, mogu opeći oči - zapravo neki testovi samo zahtijevaju da para amonijaka prolazi kroz gljivično tkivo da bi izazvala promjenu boje.

Trinokularni mikroskop

Sigurni sef mogao bi spasiti život. Imam jedan pričvršćen za zid pokraj klupe na kojoj držim svoj mikroskop (vidi gornju sliku), a idealan je za čuvanje kemikalija, žileta, staklenih stakala itd.

Spore

Gore: spore narančine kore gljiva Aleuria aurantia

Izrada dijapozitiva

Dijapozitivi koji se najlakše izrađuju su od spora. (Ovdje su prikazane spore Agaricus bisporus , komercijalne gljive s gumbima uvijek dostupne u trgovinama i supermarketima.) Sve što trebate učiniti je postaviti gljivicu, plodnu stranu prema dolje, na stakalce mikroskopa i pričekati sat ili dva.

Za razliku od pokušaja lijepog otiska spora, ne trebate čak ni sve pokriti, premda to uglavnom činim samo kao podsjetnik da se ispod nalazi komad stakla oštrih rubova. Budući da želite biti u mogućnosti vidjeti zasebne spore, a ne određivati ​​boju spora kada se nakupljaju sloj po sloj, ne treba vam gusti ispis pa ga ne smijete ostavljati predugo.

Nakon što na stakalcu nađete malo prašine od spora, dodajte kap sredstva za vlaženje (sapunska voda će poslužiti!) Ili prikladnu mrlju ako su spore bistre, a ne obojene, i na to stavite pokrivač. Melzerov reagens je dobar izbor, jer istodobno s poboljšanjem kontrasta, ako držite klizač prema svjetlu, moći ćete vidjeti jesu li spore amiloidne, dekstrinoidne ili inamiloidne - od kojih kasnije više ....

Dijapozitiv - 1

Izrada dijapozitiva od vrlo tankih kriški gljivičnog tkiva teža je i trebali biste očekivati ​​više neuspjeha nego uspjeha. Teškoća je u stvaranju doista tanke i ujednačene kriške koja sadrži značajke koje želite proučiti. Na škrge agarikoidne vrste možda biste željeli proučiti basidije - (obično) klupske oblike nastavaka na kojima se nose sterigme i spore.

Jednom kad ste odrezali tanku pločicu ili oštrim žiletom, ili otkinuli traku pomoću pincete s iglastim nosem, postupak je isti kao i za spore. Stavite svoj uzorak na stakalce, dodajte nekoliko kapi mrlje, a zatim pokrovnu pločicu, laganim pritiskom da izravnate presjek. Budite nježni: većina pokrivača je debela malo više od jedne desetine milimetra i vrlo se lako lomi. Uklonite višak mrlje upijajućom maramicom, a zatim pričekajte nekoliko minuta dok mrlja ne prožme uzorak.

Dijapozitiv - 2

Varijacija ovog pristupa - prilično lakša, ali više tehnika pogodaka i promašaja - jest zgnječiti prilično tanak primjerak između dva tobogana - srećom dijelovi koji vas zanimaju izbljuvat će se na jednom od rubova. Koristite mrlju kao prije da biste istaknuli ove značajke ruba.

Kada proučavate bazidiomicete pod mikroskopom, niste ograničeni na veličinu i oblik spora. Također možete istražiti razne vrste cistidija. To su hifalne strukture koje se ističu s raznih površina. Ovisno o tome gdje se javljaju, daju im različita imena: pleurocistidiji se javljaju na škržnim licima, heilocistidiji su oni na škržnim rubovima, pileocistidije se javljaju na površini kapice, a kalocistidije su one koje se nalaze na stabljici gljive. Oblici cistidija na svakom od ovih mjesta mogu biti različiti, a ove razlike mogu vam pomoći da, uh ... razlikujete vrste.

Škržna trama Hygrocybe chlorophana

Gore prikazana fotomikrografija prikazuje škrobnu tramu iz Hygrocybe chlorophana , zlatne voštane kapice. Ne mogu se sve voštane kapice identificirati na razini vrste ispitivanjem makroskopskih znakova. Neke je najbolje odrediti ispitivanjem pod mikroskopom, dok je nekima potreban i makroskopski i mikroskopski pregled. Zgnječenje malog komadića škržnog materijala (škrobna trama) između klizača i pokrova omogućuje vam proučavanje strukture tkiva. Neki imaju isprepletene hife; neke su pravilne (hife leže paralelno jedna s drugom), a druge su nepravilne (negdje između njih dvije). Ovdje su jasno vidljive duge stanice Hygrocybe chlorophana , dok su hifalne stanice, na primjer Hygrocybe miniata , Vermillion Waxcap) mnogo kraće.

Softver koji fotografiranje mikroskopom čini manjom bijedom

Ako ste ikada pokušali fotografirati spore ili druge dijelove gljivičnog tkiva pod mikroskopom, znat ćete kako je teško sve fokusirati. Jedan dio dobijete oštrim, a ostatak je zamagljen. Problem uzrokuje vrlo ograničena dubinska oštrina dostupna pri velikom uvećanju. Specijalistički, ali jeftini softver može vam doći u pomoć. Snimite nekoliko slika fokusirajući se na različitim dubinama u uzorak tkiva, a softver konstruira sliku pomoću izoštrenih dijelova vaših različitih slika. Mjerenje spora gljiva znatno je olakšano programom nazvanim Mycocam4. Proizveden od mikologa Richarda Shotbolta, dostupan je za besplatno preuzimanje s www.shotbolt.com - i vrlo je jednostavan za upotrebu.

Mikroskopija je specijalistički predmet, a ne nešto u što se svi koji se zanimaju za gljivice žele uključiti. Za mnogo više informacija o ovoj temi postoje specijalni tekstovi, a za pomoć u odabiru i postavljanju mikroskopa mogu se naći web stranice pouzdanih neovisnih dobavljača poput Brunela Mikroskopi su dobro polazište. Obično je moguće dogovoriti posjet kako biste razgovarali o svojim specifičnim potrebama i isprobali nekoliko alternativa.

Primjeri

Na mnogim stranicama naših vrsta gljivica vidjet ćete primjere fotografija spora spojenih mikroskopom s dodatkom za digitalni fotoaparat. Na primjer, pogledajte Laccaria bicolor , koja ima zanimljive ukrase spora; i Cuphophyllus pratensis , koji ima elipsoidne ili suzaste do subglobozne spore.


Ako su vam ove informacije bile korisne, sigurni smo da bi vam i naša knjiga Fascinated by Fungi (autorica Pat O'Reilly) bila vrlo korisna. Kopije s tvrdim uvezom s potpisom autora po posebnoj cijeni s popustom dostupne su ovdje ...

Ostale knjige o prirodi iz First Nature ...